Allergi

Trots en oerhörd utveckling inom allergidiagnostik under de senaste årtionden ställs allergologer fortfarande inför problem där oklara resultat behöver verifieras med en oberoende metod. Arsenalen med traditionella verktyg för bedömning omfattar patientens anamnes, specifikt IgE, hudtester och provokationstest. Alla dessa har sina begränsningar och ofta lågt prediktivt värde. Vid uppföljningstestning föreligger, framförallt i samband med provokationstest, en risk för anafylaxi. Därför finns skäl att hitta nya verktyg för analyser inom allergidiagnostiken.

Skafte MedLab erbjuder en lösning med CAST^®-systemet från BÜHLMANN. CAST, Cellular Antigen Stimulation Test, kan anses som en in vitro provokationstest. Sortimentet erbjuder ett komplett paket för allergidiagnostik. Systemet baseras på två teknoligiska plattformar, ELISA och flödescytometri, och omfattar över 120 standardiserade allergener. Syftet med metoderna är att mäta allergenspecifik aktivering av basofiler genom frisättning av leukotriner respektive uttryck av CD63.

Testet medför inte enbart detektion av IgE-medierade allergier utan även pseudo-allergier. Den sistnämnda typen av allergi är mest känd för Aspirin (ASA) och andra icke-steroidala antiinflammatoriska läkemedel (NSAID) samt andra läkemedel och livsmedelstillsatser. CAST analyser användas för att fastställa alla IgE medierade allergier med kontroversiella resultat vid klassisk testning (anamnes, hudtester, spec. IgE). Ytterligare specifika områden för allergier med behov av oberoende testning med cellulärtester är t.ex:

- Allergi mot Bi/Geting (motstridiga resultat; dubbel positivitet)
- Allergi mot Beta-lactam Antibiotika (bekräftelse av hudtestning)
- Allergi mot Aspirin och andra NSAID's (pseudo-allergier)
- Allergi mot Anestetika (pseudo-allergier)
- Allergi mot Livsmedel/Livsmedelstillsatser (kors-reaktivitet; pseudo-allergier)
– Latex allergi (motstridiga resultat; kors-reaktivitet)

Flow-CAST^®  för fraktion av vita blodkroppar

Flow-CAST^® är avsedd för bestämning av basofil aktivering i en fraktion av vita blodkroppar. Den basofila aktivitetsmarkören CD63 uttryckt på cellytan vid stimulering bestäms med flödescytometri.

Analysen baseras på metoden som först beskrevs av Sainte-Laudy et al. 1994 och 1996 där basofil aktivering av allergener eller kontroller mäts med flödescytometri med ökning av CD63 (gp53) på cellytan. Perifera blodleukocyter isoleras från patientens helblod primas med stimuleringsbuffert som innehåller interleukin 3 (IL-3). Specifikt allergen tillsätts och cellerna inkuberas för att efterlikna tillståndet in vivo där, vid IgE medierade allergier, specifikt IgE binds till cellytan via allergen och aktiverar en intracellulär kaskad som leder till aktivering av basofilerna. Under aktiveringen sammansmälter intracellulära komponenter innehållande transmembranproteinet CD63 med cellmembranet och utsätts därför för den extracellulära omgivningen. En höggradigt specifik monoklonal antikropp (mAb) mot en hög affinitets IgE bindande receptor (FcєRI) används som positiv kontroll, vilket leder till aktivering av basofilerna genom att efterlikna överbryggningen. Efter att reaktionen stoppats tillsätts ett färgreagens med en blandning av monoklonala antikroppar mot humant CD63 märkt med phycoerythrin (anti-CD63-PE) och mot humant IgE märkt med fluorescein isothiocyanat (anti-IgE-FITC). Kvarvarande erytrocyter avlägsnas med en lysering och efter blockering av reaktionen analyseras cellerna med flödescytometri.