Kongenital adrenohyperplasi

Kongenital adrenohyperplasi (CAH) är en ärftlig störning i syntesen för steroidhormoner och bildar inte fullgott, livsviktigt kortison. Istället bildas ett halvfärdigt hormon, inte funktionellt i ämnesomsättningen och i immunförsvaret. Detta hormon verkar som manligt könshormon. Vid CAH har man därför brist på kortison och för mycket manligt könshormon. Svåra former av CAH orsakar livshotande saltbrist och virilisering hos nyfödda. Tidig diagnos är avgörande för effektiv behandling.
Realfast Assay Kongenital adrenohyperplasi (CAH)
CAH RealFast CNV-assay ett snabbt och exakt realtids-PCR-test som används för att bestämma antal kopievariationer (CNV, copy number variations) i CYP21A2-genen. Partiella eller fullständiga deletioner av CYP21A2 är kända för att vara associerade med defekt adrenal steroidmetabolism. Kitet är utvecklat för att identifiera patienter med kongenital adrenal hyperplasi (CAH). Den semi- kvantitativa analysen skiljer mellan deletioner, duplikat och normalt kopieantal i ett genomiskt DNA-extrakt. Rekommenderas att användas tillsammans med ViennaLab CAH StripAssay (art.nr 4-380) eller DNA-sekvensering CAH är en autosomalt recessiv sjukdom i binjurebarken (incidens 1: 10.000–15,000) orsakad av genetiska defekter i steroiden 21-hydroxylas gen CYP21A2i ca 95% av fallen. Den påföljande bristen på biosyntesen av kortisol och aldosteron leder slutligen till androgent överskott. De många tecknen på kliniska manifestationer omfattar CAH med klassisk saltförlust, klassisk enkel-viriliserande CAH samt milda icke-klassiska former. De underliggande avvikelserna inom CYP21A2 genen är1) punktmutationer, 2) små deletioner/omvandlingar och 3) kromosomala omflyttningar som kompletta CYP21A2 deletioner, duplicering eller chimära CYP21A1P/CYP21A2 gener. Stora deletioner inklusive CYP21A1P/CYP21A2 chimärer står för 27% till 39% av muterade alleler i Europa och associeras i de flesta fall med en svår form av sjukdomen. Testet är baserat på realtids-PCR och hydrolysprober, brukar även kallas TaqMan prober. Varje reaktion innehåller genspecifika primerpar för amplifiering av CYP21A2 och endogen kontrollgenfragment (EG) med 141 bp vardera. Ytterligare komponenter är två dubbelmärkta, genspecifika hydrolysprober, FAM-märkt CYP21A2 prob och HEX-märkt EG-prob, som hybridiserar till en intern sekvens på de amplifierade fragmenten. Närheten mellan den 5'-fluorescerande reporter och det 3'-utsläckande färgämnet på intakta prober hindrar reportern från att fluorescera. Under förlängningsfasen i PCR klyver 5 '- 3' exonukleasaktiviteten hos Taq DNA-polymeras 5'-fluorescerande reporter från den hybridiserade proben. Den fysiska separationen av fluoroforen från det utsläckande färgämnet ger en fluorescerande signal i realtid, som är proportionell mot den ackumulerade PCR-produkten. CAH RealFast™ CNV Assay är en relativ kvantifiering analysen som jämför mängden av båda nukleinsyramålen (CYP21A2 och EG) i förhållande till en CAH CNV kalibrator. EG-genen används för att normalisera fluorescenssignaler mellan olika prover och fungerar som en positiv PCR- kontroll.
Kiten innehåller reagens för 100 reaktioner i en slutvolym av 20 µl vardera
Best.nr. Benämning Specifikation 7-410 CAH Realfast ™ CNV Assay LCT -13910C>T (100 tester) Diskriminerar mellan deletioner, dupliceringar och normalt kopieantal CYP21A2 i genen hos patienter med medfödd adrenal hyperplasi (CAH)