HLA-B27 RealFast™ Assay är ett snabbt och korrekt realtids-PCR-test för påvisande av HLA-B27-allelen, en specifik variant av HLA-antigen B (HLA-B) genen som är starkt associerad med seronegativa spondyloartropatier. Satsen används för att bekräfta diagnos av misstänkt ankyloserande spondylit, reaktiv artrit, juvenil reumatoid artrit eller anterior uveit. Den kvalitativa analysen särskiljer närvaron eller frånvaron av HLA-B27 i ett genom-DNA-extrakt och detekterar alla sjukdomsrelevanta HLA-B27-subtyper.

HLA-B-molekyler är cellyteproteiner som spelar en viktig roll vid immunitet. Frekvensen för HLA-B27-varianten är ca 8% i en generell kaukasiska population, medan mer än 90% av patienterna lider av ankyloserande spondylit (AS). Sjukdomen, som drabbar främst män i åldrarna 20 till 40 år, kännetecknas av inflammation i sakroiliakaleden och utvecklas med stelhet i ryggraden. Med en hög korrelationen med sjukdomen är HLA-B27 genotypning lämplig för differentialdiagnos av AS. Andra undergrupper av spondyloartrit är också associerade med HLA-B27, men i mindre grad.

Testet baseras på den fluorogena 5'nukleasanalysen, brukar även kallas TaqMan prober. Varje reaktion innehåller genspecifika primerpar för amplifiering av ett 184 bp fragment av HLA-B27-genen och en kontrollgen, den senare tjänar som PCR-kontroll. Ytterligare komponenter är två dubbelmärkta, genspecifika hydrolysprober som hybridiserar till målsekvensen på motsvarande fragment. Närheten mellan den 5'-fluorescerande reporter och det 3'-utsläckande färgämnet på intakta prober hindrar reportern från att fluorescera. Under förlängningsfasen i PCR klyver 5 '- 3' exonukleasaktiviteten hos Taq DNA-polymeras 5'-fluorescerande reporter från den hybridiserade proben. Den fysiska separationen av fluoroforen från det utsläckande färgämnet ger en fluorescerande signal i realtid, som är proportionell mot den ackumulerade PCR-produkten

I prover positiva för HLA-B27, FAM-märkt HLA-B27-prob samt HEX-märkt PCR-kontrollsond binder båda till lämpliga genfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i FAM-kanalen (520 nm) och HEX-kanalen (556 nm). I prover som är negativa för HLA-B27 hybridiseras enbart HEX-märkt PCR-kontrollsond till den komplementära strängen hos kontrollgenfragmentet. En stark fluorescenssignal detekteras i HEX kanalen och ingen eller endast en baslinjesignal i FAM-kanalen.
Kitet innehåller reagens för 100 reaktioner med en slutlig volym på vardera 20 μl.
Kiten innehåller bruksfärdigt reagens till 20 tester. Analysen kan utföras i fyra enkla steg på mindre än 6 timmar, manuellt eller automatiserat.